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  PCR P2凈化實驗室
  型號:
 
 

PCR實驗室凈化工程 

PCR實驗室凈化工程試劑的操作樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題,一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。

 建立前PCR區。
該去專門用于準備各種反應,這個區域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備,特別是專門用于前PCR區的正壓活塞式,在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。⑷所用試劑都應該以大體積配制,實驗一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。⑸所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。⑹新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。 樣品準備和前PCR區所使用的在不使用時都應該小心保存。
 
在前PCR區建立PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實驗室凈化工程只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。⑵如果你的實驗室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟,可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個規則,應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產物的污染,凈化工程陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。⑸當做陽性對照時,有兩個理由決定了應該使用最少數量的核酸。⑹由于必須有對照反應,對照模板的特點應該予以考慮。
 
控制污染的方法。
凈化工程設計出很有力的酶學方法用來消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術能有效地消除由PCR產物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線,這種方法不能完全消除污染問題,但可以將污染降低幾個。
7、后PCR區PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數據,應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑
 
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